Biotin peptidek

Mik azok a biotinilált peptidek?

A biotinilált peptidek olyan peptidek, amelyeket úgy módosítottak, hogy biotinrészt tartalmazzanak. Ez a módosítás kihasználja a biotin és az avidin vagy sztreptavidin közötti nagy affinitású kölcsönhatást, amelyet széles körben használnak biológiai és biokémiai alkalmazásokban. A biotin molekula kicsi, stabil, és nem változtatja meg jelentősen a peptid szerkezetét vagy funkcióját, miközben lehetővé teszi az avidin-alapú rendszereken keresztüli rendkívül hatékony befogást vagy kimutatást.

 

Kémiai módosítás
A biotint jellemzően egy NHS-biotin (N-hidroxi-szukcinimid biotin) reagenssel juttatják be, amely reakcióba lép a peptid N-terminálisán található primer amincsoportokkal vagy a lizin-maradékokkal, és stabil amidkötést képez.

生物素(biotin） 肽（peptid）

COOH NH₂

| |

+---EDC/NHS---→ 活化羧基（Aktiválás） → 缩合（Kapcsolás）

↓ ↓

Biotin-CONH-peptid

 

Affinitási interakció
A biotinilezett peptid erősen (Kd ~10-15 M) kötődhet avidinhez vagy sztreptavidinhez, így ideális olyan vizsgálatokhoz, amelyek pontos kimutatást, befogást vagy immobilizálást igényelnek.

Biotinilált peptid szintézis esetei

Peptidszekvencia: Biotin-Ahx-YXXXXXRXRRR-NH2

Hossz: 11A

Purity: >95%

M.W: 1898.32

Peptidszekvencia: Biotin-YXXXXXRXRRR--ERXXXDLXXXXPVXXXXPRR

Hossz: 31A

Purity: >95%

M.W: 4145.89

 

Biotinilált peptidek alkalmazásai

A biotinilált peptidek sokoldalú eszközök a kutatásban és az iparban, széles körű alkalmazási lehetőséggel, többek között:

Affinitástisztítás

A kötőpartnerek, például fehérjék, antitestek vagy nukleinsavak tisztítására használják a biotinilált peptid sztreptavidin gyöngyökön történő rögzítésével.

ELISA és Western-blot

A biotinilált peptidek próbaként működnek a specifikus kölcsönhatások kimutatására, ha avidin{0}}HRP-vel vagy avidin-fluoreszcens jelölésekkel kapcsolódnak.

Felületi plazmonrezonancia (SPR)

Használható peptidek immobilizálására bioszenzoros chipeken interakciós vizsgálatokhoz.

Drogfelfedezés

Gyógyszerjelöltek szűrése biotinilált peptid célpontokhoz való kötődésük elemzésével.

Immunológia

A biotinilált peptideket epitópok feltérképezésére, antigén{0}}ellenanyag-kölcsönhatások tanulmányozására és T-sejtvizsgálatok elvégzésére használják.

Epitóptérképezés a vakcinafejlesztéshez

Egy egyedi biotinilezett peptidet használtak a vírusfehérje antigén epitópjainak azonosítására, elősegítve a vakcinajelölt megtervezését.

Protein{0}}Protein Interaction Studies

A streptavidin{0}}bevonatú lemezeken rögzített biotinilezett peptidek lehetővé tették a receptor-ligandum kölcsönhatások tanulmányozását, feltárva a gyógyszerfejlesztés szempontjából kritikus kötési affinitásokat.

Immunoassay optimalizálás

Egy diagnosztikai vizsgálatban biotinilezett peptideket alkalmaztak antigénként, hogy javítsák az ELISA érzékenységét és specifitását a betegség biomarkereinek kimutatására.

 

Hivatkozások

1. Green, NM (1975).Avidin és streptavidin.Biochemical Journal, 131(3), 781-791.

2. Chaiet, L. és Wolf, FJ (1964).A streptavidin, a Streptomyces által termelt biotin{0}}kötő fehérje tulajdonságai.Archives of Biochemistry and Biophysics, 106(1), 1-5.

3. Finn, FM és Titus, G. (1994).Fehérjék biotinilezése a kutatásban és a biotechnológiában.Anal Biochem, 218(1), 1-7.