-
Telefon
+86-0755 2308 4243
-
Cím
309. szoba, Meihua Building, Tajvani Ipari Park, No.2132 Songbai Road, Bao'an District, Shenzhen, Kína
-
E-mailben
GYIK
Milyen szintézismódszereket használ a Biorunstar a peptidszintézishez?
RE: A Biorunstar különböző megoldásfázisú szintézis módszertant fejlesztett ki, hogy megfeleljen az ügyfelek igényeinek. Általában szilárd fázisú Fmoc kémiát alkalmaznak.
Hogyan szállítod a peptideket? Milyen minőségellenőrzési adatok lesznek megadva?
RE: Az összes peptidet a DHL vagy a FedEx expressz szállítja, liofilizált por formájában, különálló, jól felcímkézett fiolákban, szobahőmérsékleten. A nyers peptidek kivételével, amelyeket csak MALDI-MASS spektrometriával ellenőriznek, minden szintetikus tisztított peptidhez projektjelentés (CoA), MS adatok és HPLC adatok tartoznak. adatlapokat biztosítunk, amelyek tartalmazzák a legfontosabb jellemzőket, például peptidszekvenciát, tisztaságot, mennyiséget, módosítást, tömegspektrum-adatokat és HPLC-adatokat.
Mi a peptidszintézis tipikus átfutási ideje? Mennyi ideig tart a kiszállítás nekem?
RE: Tipikus átfutási időnk 2-3 hét egy 30 aminosav alatti standard peptid esetében. Az átfutási idő a peptid hosszától, mennyiségétől, oldhatóságától és nehézségi fokától függően változik. Általában 3-5 nap a más országok kutatóinak eléréséhez.
Mennyi ideig tudsz szintetizálni?
RE: A Biorunstar nagy tapasztalattal rendelkezik a hosszú, akár 130 aminosavig terjedő peptidek szintézisében. Ellentétben sok olyan peptid beszállítóval, akik csak 30 vagy 40 aminosav alatti peptideket készítenek kényelmesen, a Biorunstar jó tapasztalattal rendelkezik a 40 és 90 aminosav közötti peptidek előállításában. Nehéz hosszú peptideket szintetizálni, különösen a 100 aminosavból álló vagy annál hosszabb peptideket. Ha 130 aminosavból álló vagy hosszabb szekvenciát szeretne szintetizálni, kérjük, vegye fel velünk a kapcsolatot az egyedi fehérje expressziós és tisztítási szolgáltatásért.
Mi a teendő, ha problémák merülnek fel a szintézis vagy a tisztítási folyamat során?
RE: Minden peptidnek megvannak a sajátos jellemzői. Ha a szintézis során várakozásainkon felüli probléma adódik, és nem tudjuk időben szállítani a peptidet, a lehető leghamarabb értesítjük. Véletlenül, ha nem tudjuk elkészíteni a peptidet, nem számítunk fel semmilyen költséget.
TFA só forma, acetát vagy HCl só forma: Melyik formát válasszam?
Alapértelmezés szerint a peptideket TFA-sóban szintetizálják. Sejt- vagy szövettenyésztéssel kapcsolatos kísérleteknél érdemes megfontolni, hogy a peptidek acetát vagy HCl-só formájában 98%-ban vagy magasabb arányban termelődjenek a rendellenes válaszok elkerülése érdekében. Acetát vagy HCl só forma felár ellenében igényelhető.
Mennyi a peptid eltarthatósági ideje?
RE: A peptidek legalább egy évig stabilak, ha liofilizálva, fagyasztóban tárolják. Ha a peptideket feloldják, az eltarthatósági idő csökkenhet. Ha a peptidek több reaktív aminosavat tartalmaznak, amelyek oxidálhatók, mint például a Trp, Met, de különösen a Cys, az eltarthatósági idő is csökkenhet.
A peptid számos ciszteint tartalmaz, ezért könnyen diszulfid kötéseket tud kialakítani. Hogyan kerülhetem el ezt?
RE: Ha a peptidszekvencia több ciszteint vagy más reaktív aminosavat tartalmaz, amelyek könnyen oxidálódnak, a Biorunstar felajánlja, hogy a peptidet nyomokban erős redukáló DTT-vel szállítja. A peptidet csak akkor szállítjuk DTT-vel, ha ezt az ügyfél kifejezetten engedélyezi.
Hogyan tárolhatom a szintetikus peptideimet?
RE: A legtöbb liofilizált peptid szobahőmérsékleten 2-3 hétig stabil. Hosszú távú tároláshoz a liofilizált peptideket -20 fokon kell tárolni. Kerülni kell az ismételt fagyasztási-olvadási ciklusokat. Felbontás előtt hagyja szobahőmérsékletűre melegedni. A peptidoldatok eltarthatósága korlátozott; az elkészített peptidoldatot a lehető leghamarabb fel kell használni.
Milyen tisztaságú a nyers peptid és a sómentes peptid? Hogyan tisztítod a peptidet? Mik a szennyeződések?
RE: A 15 aminosav alatti normál szekvenciájú rövid peptidek esetében ez általában 40-60% HPLC-vel a nyers minőségre; 50-70% HPLC-vel sómentesített minőség esetén. Minél hosszabb a peptid, annál kisebb a tisztasága a nyers vagy sótalanított termék esetében. A peptideket általában HPLC-vel tisztítják víz és acetonitril gradiens alkalmazásával. A legtöbb szennyeződés fragmentum vagy deléciós peptid, nem teljesen védőcsoport-mentesített peptid, valamint maradék só és víz.
A peptidtisztaság magyarázata HPLC-vel, a teljes peptidtartalom és a cél peptidtartalom.
RE: A Biorunstar a peptideket a liofilizált por bruttó tömegének megfelelően szállítja. A liofilizált por szennyeződéseket, például fragmentumokat vagy deléciós peptideket, nem teljesen védőcsoport-mentesített peptideket, TFA-t és maradék vizet tartalmaz. A peptid tisztaságát HPLC-vel mérjük. Ez a megfelelő peptid mennyisége az összes analithoz viszonyítva, amely ~214 nm-en abszorbeál (a peptidkötés elnyeli), valószínűleg deléció, csonkítás vagy nem teljesen védőcsoport-mentesített szekvenciák stb. amelyek általában jelen vannak a mintában. A teljes peptidtartalom a liofilizált peptidporban jelenlévő összes peptid százalékos aránya. A teljes peptidtartalmat nitrogéntartalom-analízissel határozzuk meg. A liofilizált peptidporban a megcélzott peptidtartalom így a következő képlettel állapítható meg: Teljes peptidtartalom x peptid tisztaság HPLC-vel.
Mi a fluoreszcein jelölési módszer?
RE: A FITC (fluoreszcein-izotiocianát) a fluoreszcein jelöléshez használt aktivált prekurzor. A hatékony N-terminális jelöléshez egy hétatomos aminohexanoil
spacer (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) van beillesztve a fluorofor (fluoroscein) és a A peptid N-terminálisa. Ez a távtartó segít elválasztani a fluorofort a csatlakozási pontjától, potenciálisan csökkentve a fluorofor kölcsönhatását a biomolekulával, amelyhez konjugált, és hozzáférhetőbbé teszi a másodlagos detektáló reagensek számára.
spacer (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) van beillesztve a fluorofor (fluoroscein) és a A peptid N-terminálisa. Ez a távtartó segít elválasztani a fluorofort a csatlakozási pontjától, potenciálisan csökkentve a fluorofor kölcsönhatását a biomolekulával, amelyhez konjugált, és hozzáférhetőbbé teszi a másodlagos detektáló reagensek számára.
Lehetséges a biotin (vagy FITC) C-terminális jelölése?
RE: Igen. A biotin (vagy FITC) C-terminális jelölése a peptid C-terminálisához lizin-maradék hozzáadásával történik, és a biotin (vagy FITC) amidkötésen keresztül kapcsolódik a lizin oldalláncához. A lizin pozitív töltése megszűnik.
Mekkora a megfelelő peptidhossz az antitesttermeléshez?
RE: Általában egy 10-25 maradék peptid javasolt. Egy hosszabb peptidnek több epitópja lehet, de nagyobb esélye lehet stabil másodlagos struktúrák kialakítására, amelyek nem natív formák. Egy rövidebb peptid (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
Mi az a MAP?
RE: A MAPS vagy Multi-Antigenic Peptide egy elágazó peptid, amelynél lineáris peptidláncok kapcsolódnak a C-terminálisukhoz polilizin magon keresztül, ezáltal növelve a teljes molekula méretét. Ennek célja a peptidek KLH-hoz való kapcsolódásának megszüntetése. Úgy tűnik azonban, hogy a peptidek MAP-on való konformációja kevésbé rugalmas, és a MAP-pal nyert antitestek jellemzően ritkábban ismerik fel a célfehérjét, mint a hagyományos KLH-konjugációval. Ezenkívül a MAPS előállítása során nem termelődik szabad peptid, ami megnehezíti a polilizin magra irányított antitestek eltávolítását. A MAPS HPLC-vel történő tisztítása nehéz, és a MAPS-t tömegellenőrzés nélkül biztosítják heterogenitása és nagy molekulamérete miatt.
Miért tűnik zavarosnak a KLH-konjugált peptid oldatom?
RE: A KLH vagy Keyhole Limpet Hemocyanin egy nagy aggregáló fehérje (MW=4x105 – 1x107). Mérete és szerkezete miatt vízben való oldhatósága korlátozott, ami zavaros megjelenést okoz. Ez nem befolyásolja az immunogenitást, és a zavaros oldat immunizálásra használható.
Meg tudod magyarázni az M+Na és M+K tömegcsúcsokat a MALDI spektrumokban?
RE: Nagyon gyakori a Na (nátrium) és K (kálium) adduktok megjelenése a MALDI spektrumban. A nátrium és a kálium a peptid oldószerekben használt vízből származik. Még a desztillált és ionmentesített víz is tartalmaz nyomokban nátrium- és káliumionokat, amelyeket soha nem lehet teljesen eltávolítani. Ezek a MALDI tömegspektrumi folyamat során ionizálódnak, és a peptid szabad karboxilcsoportjaihoz kötődnek. Mivel nincs olyan víztisztító rendszer, amely minden egyes nátrium- vagy káliumiont eltávolítana a vízből, a nátrium- és káliumadduktumok időnkénti megjelenése nagyon gyakori és elkerülhetetlen a MALDI tömegspektrumában. Ez nem azt jelzi, hogy a peptid nem tiszta, és nem is összetévesztendő a helytelen molekulatömeggel.